解决计划
- 转录水平RNA高通量研究为人们深入了解生物学历程中转录调控、信号转导机制、疾病分子病理分型等提供了重要的研究要领。常用的高通量研究要领如基因芯片、RNA测序等 ，可爆发大宗信息 ，然而这些技术对样品质量要求很高 ，同时用度腾贵。且其实验结果往往需要做qPCR进行验证。然而在对多基因进行定量研究时 ，古板的qPCR要领由于实验操作办法多且繁复 ，通量明显缺乏 ，无法满足多重基因定量检测的需求。别的 ，临床样品通常为FFPE样本 ，在制备和贮存历程中会造成大宗RNA降解、断裂。因此 ，qPCR及RNA-seq都难以对这种样本进行精确定量剖析。针对以上问题,NanoString给出了完美的解决计划：基于杂交原理建立的NanoString数字化基因剖析系统直接检测条形码探针标记的单个mRNA转录子 ，并通过数字计数进行定量。此历程无需酶促和扩增历程。仅需100 ng的RNA即可对逾八百个特异的mRNA转录子进行准确的定量。其检测的敏感性和准确性与实时定量PCR(RT—PCR) 技术相当。
- NanoString技术可以不经过RNA提取 ，直接在FFPE样本 ，细胞裂解液乃至全血中对RNA进行定量 ，进一步降低由于提取历程可能带来的潜在偏差。近年来 ，NanoString技术被越来越广泛地应用到生物医学前沿领域 ，包括高通量基因表达结果验证、基因表达谱研究、基因调控网络研究、临床疾病分子分型及诊断预后等领域。
NanoString技术特点
- 数字化-单分子数字式直接计数 ，可用于数字化剖析或验证第二代测序所确定的目标高精准度-无需逆转录、 PCR扩增 ，直接检测RNA分子数量 ，获得基因表达情况高灵敏度- 飞摩尔(10-15)级别灵敏度 ，与qPCR匹敌多重检测- 单管最多可同时检测800种目标分子自动化水平高- 只需要三个简单手动操作办法 ，最洪流平制止人为因素的滋扰样本兼容性高- 高效检测FFPE包埋切片 ，直接检测血液和细胞裂解液等 ，无需RNA提取纯化应用广泛- Gene Expression, miRNA Expression, miRGE, CNV, Gene Fusion, Single Cell Expression, Protein, RNA & Protein共检测
nCounter SPRINT
nCounter Pro - 技术原理
- 操作流程
- 结果剖析
nSolver? Analysis Software
ROSALIND? Platform - 针对差别通路所生成的热图
细胞因子和趋化因子通路
JAK-STAT信号通路
NF-kappaB信号通路
Wnt信号通路 - 差别通路基因在火山图中的体现
细胞因子和趋化因子通路
JAK-STAT信号通路
NF-kappaB信号通路
Wnt信号通路
